Doplnky | Veda

Materiály / metódy, podtext, tabuľky, štatistiky a / alebo poznámky

Stiahnite si sub

• Obr. S1 až S11
• Tabuľky S1 až S3
• Názov pre filmy S1 až S7

Kontrolný zoznam reprodukcie MDAR

Obrázky, video a ďalšie médiá

Film S1

Nekruhové bunky hela-kjóto snímajú rozdiel medzi 10 a 5 μm bunkami – riadia bunky na 5, ale nie do výšky 10 m, čo indukuje rýchle získavanie myozínu II z cytosolu do kôry. Len čo dosiahne výšku 10 m, reprezentatívna bunka exprimuje MYH9-GFP (pseudocolor s použitím režimu horúcej LUT s teplými a studenými tónmi predstavujúcimi vysoký a nízky fluorescenčný signál MYH9-GFP). Vpravo, rovnaká cela po 5 m väzenia. Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi obrázkami, 5 s. Stupnica, 5 m.

Film S2

Kruhové bunky hela-kjóto prechádzajú jedinečným morfodynamickým prechodom z nekontrolovanej bunkovej výstelky a tvorby fylopodií, aby reagovali na väzenie 10 až 5 metrov. Vľavo reprezentatívna bunka vystavujúca MYH9-GFP (atrapa purpurovej farby) a LifeAct-M čerešňa (atrapa azúrovej farby) počas väzenia 20 až 10 m. Vpravo, rovnaká cela počas väzenia 10 až 5 metrov. Obrázok diferenčnej interferencie-zmeny (DIC) riadeného plochého mikrokondicionéra je zobrazený v sivom kanáli. Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi obrázkami, 5 s. Stupnica, 5 m.

Film S3

Kruhové bunky hela-kjóto rozširujú svoje jadrá a otvárajú jadrový obal pred začiatkom odpovede kontraktilných buniek vystavených aktívnemu krvácaniu z plazmatickej membrány počas väzenia 10 až 5 m. Reprezentatívna bunka LAP2-GFP je vystavená atómovému obalu (zelená) a kontaminovaná SiR-aktínom za vzniku f-aktínu (pseudofarba v purpurovej farbe). Bunka bola obmedzená na 20 až 10 až 5 metrov. Video je umelo pozastavené niekoľkokrát počas 10 až 5 μm posunu jadrovej expanzie-expanzie, predtým ako bunka najskôr stiahne prvé kruhové zlúčeniny. Tieto štruktúry predstavujú pasívne výčnelky podobné krvácaniu, ktoré sa objavujú stláčaním tela bunky (t.j. keď je endoteliálna tekutina tlačená proti plazmatickej membráne prasklinami, ktoré už existujú v bunkovej výstelke). Naše ďalšie pozorovania (údaje nie sú zobrazené) ukazujú, že takéto „pasívne“ trhliny akumulujú takmer okamžite submperonický kortikálny F-aktín. Nepretržité aktívne krvácanie je iniciované aktívnymi motormi myozínu II lemujúcimi „neaktívne“ plaky. „Aktívne“ rozdelenia sú početné, často majú veľkú dĺžku a sú v porovnaní s ich „pasívnymi“ náprotivkami podstatne menšie. Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi obrázkami, 5 s. Stupnica, 5 m.

Film S4

Necirkulované nukleárne bunky helio-kjóta (cytoplasty) nevnímajú rozdiel medzi výškami väzenia spojenými so skrátenou reakciou v jadrových bunkách. Vľavo unikli reprezentatívna jadrová bunka, ktorá vykazuje MYH9-GFP (pseudo-farba v purpurovej farbe) a LifeActmary (pseudo-farba v azúrovej farbe), ošetrenie a odstredivý protokol potrebný na generovanie nukleárnych cytoplastov. Správne, reprezentatívny jadrový cytoplast. Video začína vykreslením nedefinovaného stavu týchto buniek, po ktorom nasleduje väzenie na 20 až 10 až 5 m. Všimnite si, že aj napriek svojej malej veľkosti (výške), nukleárna bunka, ktorá uniká z protokolu generovania cytoplastov, začína s predĺženou, aktívnou kontralaterálnou reakciou (myozín II a intenzívne krvácanie z plazmatickej membrány) predtým, ako sa kontrolovaný konzol zastaví na 5 μm na 27. Pohyb od 10 do 5 m. Jadrový cytoplast však vykazuje iba pasívnu odpoveď vo forme nestabilných výbežkov podobných plaku vytvorených fyzickým stlačením cytoplastu počas väzenia 10 až 5 m. Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi obrázkami, 5 s. Stupnica, 5 m.

Film S5

Stlačením bunkovej výstelky do výšky väzenia 0,5 m sa získajú iba lokálne a veľmi nestabilné výbežky podobné plakom bez globálneho vplyvu na hladiny kontrakcie oktomyozínu. Vľavo reprezentuje bunku Hella-Kyoto reprezentatívna MYH9-GFP (pseudofarebná purpurová), čerešňa Lifeact-M (pseudofarebná azúrová) a navyše DAPI (pseudofarba žltá). Obrázok diferenčnej interferencie-zmeny (DIC) riadeného plochého mikrokondicionéra je zobrazený v sivom kanáli. Upravila sa presná poloha kondenzátora, t. J. Lamelárna, ale nie elementárna schránka zapojená do lokálnej kontrakcie buniek. Nadčasové video bunky reagujúcej na správnu silnú lokálnu kortikálnu kontrakciu (väzenie 500 nm). Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi obrázkami, 5 s. Mierka, 10 m.

Film S6

Indukcia globálnej reakcie endogénnych kontraktilných buniek na miestne jadro, ale nie väzenie / väzenie na cytoplazme. Reprezentatívne bunky hela-kjóto s MYH9-GFP (pseudo-farba v purpurovej farbe), LifeAct-M-cherry (pseudo-farba v azúrovej farbe) a DAPI (pseudocolor v žltej farbe na odhalenie jadrovej skrinky) sú zobrazené na videu. Obrázok diferenčnej interferencie-zmeny (DIC) riadeného plochého mikrokondicionéra je zobrazený v sivom kanáli. Upravila sa presná poloha kondylu, to znamená, že v miestnej bunke boli uzamknuté iba jadrová skrinka dolného článku a lamelová časť horného článku. Výška zapínania, 2 m. Upozorňujeme, že zatiaľ čo väzenie na lokálnu výstelku / cytoplazmu produkuje výčnelky (pasívna reakcia na kontrakciu tela), ako je lokálne krátkodobé krvácanie, lokálne väzenie špecifické pre jadro vedie k trvalému nárastu globálnej kontrakcie buniek. Do tohto stavu sa prepne s oneskorením (prenos aktivačného signálu). Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi obrázkami, 5 s. Mierka, 10 m.

Film S7

Populácia nezrelých dendritických buniek (ITC) vystavených LifeAct-GFP je uväznená v mikro-vyrobených zariadeniach. ITC odvodené z primárnej kostnej drene myší Lifeact-GFP boli liečené kontrolovanou CRNA alebo CRNA zameranou na CPLA2. Bunky boli jednotlivo obmedzené na 4 a 3 um výšky a snímané pomocou fluorescenčnej videomikroskopie. Časový interval medzi po sebe nasledujúcimi filmami, 2 min. Stupnica, 25 m.